Nghiên cứu thực nghiệm áp dụng quy trình nuôi cấy và bảo quản tạo cốt bào biệt hóa từ tế bào gốc trung mô tủy xương

Abstract

THÔNG TIN TÓM TẮT NHỮNG KẾT LUẬN MỚICỦA LUẬN ÁN TIẾN SĨTên đề tài: “ Nghiên cứu thực nghiệm áp dụng quy trình nuôi cấy và bảo quản tạo cốt bàobiệt hóa từ tế bào gốc trung mô tủy xương”.Mã số: 62720103; Chuyên ngành: Mô- Phôi thai họcNghiên cứu sinh: Lê Thị Hồng NhungNgười hướng dẫn: 1. PGS.TS. Ngô Duy Thìn 2. PGS.TS.Lý Tuấn KhảiCơ sở đào tạo: Trường Đại Học Y Hà NộiNhững kết luận mới của luận án:Trong vài thập niên gần đây trên thế giới cũng như ở Việt Nam đã có nhiều công trìnhnghiên cứu về tế bào gốc. Trong những năm đầu, các nghiên cứu đa phần tập trung vào nhữngvấn đề cơ bản do sự hiểu biết về tế bào gốc còn ít.Tuy nhiên những năm gần đây các nghiêncứu bắt đầu mang định hướng thực tiễn, đặc biệt các nghiên cứu nhằm tìm ra phương pháp, kỹthuật, chất liệu, môi trường, giá thể để nuôi cấy tế bào gốc phục vụ điều trị. Mặc dù các nghiêncứu trên thực nghiệm không hoàn toàn được áp dụng trên người song nhờ đó mà các nghiêncứu ứng dụng trên người mới có cơ sở để thực hiện.Tế bào gốc trung mô là một trong những dòng tế bào được nghiên cứu nhiều nhất donhững ưu điểm của nó trong mục đích sử dụng cùng như khả năng được biệt hóa. Tại Việt Nam, tếbào gốc trong mô tách chiết từ tủy xương cũng đã được nghiên cứu trên thực nghiệm đánh giá khảnăng liền xương sau cấy ghép san hô chứa tế bào gốc nuôi cấy ( Huỳnh Duy Thảo). Tuy nhiên thờigian nuôi cấy trong môi trường biệt hóa lên đến 21 ngày, nghiên cứu của chúng tôi, giai đoạn nàychỉ 7 ngày, giảm đáng kể thời gian và kinh phí. Mặt khác, để định danh dòng tế bào sau biệt hóachúng tôi đã sử dụng đầy đủ các kỹ thuật định danh hiện đại như hóa mô miễn dịch, kỹ thuật quansát dưới hiển vi điện tử và đặc biệt đã đánh giá được khả năng tạo xương trên động vật.Đểm mới thứ 2 của luận án là kết quả bảo quản lạnh tế bào gốc tạo xương trong môitrường không huyết thanh. Bảo quản lạnh trong môi trường có huyết thanh (FBS) là một kỹthuật thường qui. Tuy nhiên sự có mặt của huyêt thanh, đặc biệt huyêt thanh bào thai bò (FetalBovine Serum) thường gây cho các nhà lâm sàng lo ngại về khả năng lây nhiễm một số bệnhvirus cũng như độ tinh khiết của nó. Bên cạnh đó huyết thành khá đắt, việc nghiên cứu tế bàogốc vì mục đích điều trị đòi hỏi một sản phẩm an toàn. Trong luận án này chúng tôi đã bảoquản thành công tế bào gốc trong môi trường không huyết thanh với tỷ lệ tế bào sống trên60%, với tỷ lệ tế bào sống chưa cao so với bảo quản trong môi trường có huyết thanh, songđây cũng là một kết quả mới có ý nghĩa thực tiễn cao áp dụng trong lâm sàng.Tóm lại luận án là một công trình khoa học mà kết quả nghiên cứu có những đóng gópmới, có ý nghĩa thực tiễn trong lĩnh vực nghiên cứu tế bào gốc ở Việt Nam, trong đó kết quảbiệt hóa thành công tế bào gốc trung mô thành tế bào gốc tạo xương, kết quả nghiên cứu khảnăng tạo xương trên thực nghiệm, kết quả bảo quản lạnh tế bào trong môi trường không cóhuyết thanh là những đóng góp mới.Hà nội, ngày 20 tháng 01 năm 2019Người hướng dẫnPGS.TS. Ngô Duy ThìnNghiên cứu sinhLê Thị Hồng Nhung

SOCIALIST REPUBLIC OF VIETNAMIndependence - Freedom - HappinessSUMMARY OF NEW CONCLUSIONS OF THE DOCTRINE THESIS’SName of the Thesis: "Experimental research to apply protocol culture and cryopreservation ofosteoblast from differentiation bone marrow mesenchymal stem cell".Code: 62720103. Specialization: Histology and embryologyPhD student: Le Thi Hong Nhung. Fellow course: 31Thesis Supervisors: 1.Assoc Prof. PhD. Ngo Duy Thin 2. Assoc Prof. PhD. Ly Tuan KhaiTraining facility: Hanoi Medical UniversityNew result of thesisIn recent decades in the world as well as in Vietnam, there have been many researchprojects on stem cells. In the early years, studies mostly focused on the fundamental issues dueto the lack of understanding of stem cells. However, in recent years studies have begun to takepractical orientation, especially in studies to find methods, techniques, materials, media andscaffold contain stem cell to treat malignant disease. Although experimental studies are notcompletely applied on humans, it is therefore the applied research on humans that has the basisfor implementation.Mesenchymal stem cells are one of the most studied cell lines due to its advantages in itsintended use and differentiation. In Vietnam, mesenchymal stem cell isolation from bonemarrow to evaluate the ability to regenerate bone tissue after graft from the combination of seacoral and autologous osteoblast on experimental (Huynh Duy Thao). However, the cell cultureuntil day 21, our study, this period is only 7 days, significantly reducing time and funding. Onthe other hand, to identify the cell line after differentiation we have fully used modernidentification techniques such as immunohistochemistry, observation techniques underelectron microscopy and evaluation the ability to regenerate bone tissue in animals.The second new topic of the thesis is the result of cryopreservation osteoblast in a serumfree medium. Cryopreservation medium with serum (FBS) is a routine technique. However,freezing medium containing FBS (Fetal Bovine Serum), especially animal serum can someadverse effect in patients. It has risks related to viral transmission or xenoprotein relatedreactions. Besides, serum are quite expensive, stem cell research for treatment purposesrequires a safe product. In this research, we demonstrated the possibility developing a welldefined, serum-free freezing solution. The viabilities of osteoblast cryopreserved over 60%.Rate viability was not highest among freezing solution with serum. These results,cryopreservation can satisfy standards for clinical usageIn summary, the thesis is a scientific work with the research results have newcontributions, significance in the field of stem cell research in Vietnam, in which the results ofsuccessful differentiation mesenchymal stem cell into osteoblast, the results ofcryopreservation medium cell without serum are new contributions.Director of ThesisAssoc Prof. PhD. Ngo Duy ThinCandidateLe Thi Hong Nhung