Nghiên cứu phát hiện đột biến gen ATP7B trên bệnh nhân wilson

Abstract

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự do – Hạnh phúc . -------------------------------------. THÔNG TIN TÓM TẮT VỀ NHỮNG KẾT LUẬN MỚI . CỦA LUẬN ÁN TIẾN SĨ. Tên luận án: Nghiên cứu phát hiện đột biến gen ATP7B trên bệnh nhân wilson. Họ và tên NCS: Phan Tôn Hoàng. Chuyên ngành: Hóa sinh Mã số: 62720112. NỘI DUNG TRÍCH YẾU:. Wilson là bệnh gây rối loạn chuyển hóa đồng đã được mô tả từ lâu và gặp ở nhiều quốc gia trên thế giới. Đây là bệnh lý di truyền lặn trên nhiễm sắc thể thường (13q14.3). Do đột biến gen ATP7B, Gen ATP7B mã hóa cho enzym P-type ATPase tương ứng, có chức năng vận chuyển đồng trong cơ thể. Bệnh Wilson biểu hiện sự tích tụ đồng ở gan và các cơ quan khác của cơ thể như não, mắt, thận, da, xương, khớp. Việc áp dụng các kỹ thuật sinh học phân tử hiện đại để xác định chính xác các đột biện gen gây bệnh Wilson là cần thiết, đặc biệt ở nhóm bệnh nhân có tiền sử gia đình hoặc bệnh nhân có các triệu chứng không điển hình.. Phương pháp nghiên cứu: Tiến cứu và mô tả cắt ngang. Thiết kế nghiên cứu gồm các bước: (1). Xác định bệnh nhân Wilson; (2). Thu thập mẫu máu (3ml máu tĩnh mạch+EDTA); (3). Tách chiết DNA từ mẫu máu của bệnh nhân nghiên cứu; (4). Phản ứng PCR khuyếch đại 21 exon của gen ATP7B; (5). Tinh sạch sản phẩm PCR; (6). Giải trình tự gen; (7). So sánh với genbank; (8). Xác định đột biến gen ATP7B; (9). Thiết lập bản đồ đột biến gen ATP7B.. Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu: kỹ thuật tách chiết DNA. Phản ứng PCR khuếch đại 21 exon gen ATP7B. Kỹ thuật giải trình tự gen phát hiện đột biến.. Kết quả nghiên cứu: (1). Nghiên cứu đã xác định được 48/61 bệnh nhân, chiếm tỷ lệ 78,69%, có đột biến gen ATP7B. Có 28 dạng đột biến khác nhau với tổng số 117 đột biến tìm thấy trên gen ATP7B, trong đó có 12 kiểu đột biến mới được phát hiện trên bệnh nhân nghiên cứu chưa có tài liệu nào công bố. Các đột biến đa dạng bao gồm: Đột biến tại vùng 5’UTR, đột biến tạo mã kết thúc sớm, đột biến thay thế nucleotid, đột biến thêm nucleotid, đột biến trên vùng không mã hóa và cả trên vùng mã hóa của gen.. (2). Đã thiết lập được bản đồ đột biến gen ATP7B trên các bệnh nhân Wilson Việt Nam, với tổng số 117 đột biến thuộc 28 kiểu nằm trên 13 exon và vùng chức năng của gen, trong đó có 12 đột biến mới được tìm thấy trên bệnh nhân mà chưa thấy công bố trong tài liệu chính thức nào. Đây là nghiên cứu phát hiện đột biến gen ATP7B một cách toàn diện lần đầu tiên thực hiện ở Việt Nam. Sử dụng các kỹ thuật sinh học phân tử hiện đại. Những kết quả của luận án đóng góp quan trọng vào bộ sưu tập các đột biến liên quan đến bệnh Wilson, góp phần lý giải cho cơ chế bệnh sinh, thiết lập được phương chẩn đoán tin cậy giúp cho việc sàng lọc và tư vấn di truyền hướng tới mục đích ngăn ngừa và giảm tỷ lệ mắc bệnh.. Hà Nội, ngày 10 tháng 9 năm 2015. NGƯỜI HƯỚNG DẪN PGS.TS Nguyễn Ngọc Hùng NGHIÊN CỨU SINH Phan Tôn Hoàng

. MINISTRY OF HEALTH SOCIALIST REPUBLIC OF VIETNAM. HANOI MEDICAL UNIVERSITY Independence - Freedom - Happiness. ---------------------------------. SUMMARY OF DOCTOR'S THESIS. Name of the thesis: Research detection of mutations in ATP7B gene of patients with Wilsons’s disease.. Name of PhD student: Phan Ton Hoang. Major: Biochemistry PhD Course: 30 Code: 62720112. Supervisors: Nguyen Ngoc Hung MD., PhD., Ass Prof.. Training University: Hanoi Medical University. New contributions of the thesis:. Wilson 's disease disrupting copper metabolism was described long ago and found in many countries around the world. This is a recessive genetic disease on autosomes (13q14.3). Mutations occur in ATP7B gene, coding for the enzyme ATP7B P -type ATPase, respectively, with copper transport function in the body. Therefore, it is essential to apply modern molecular biology techniques to determine genetic mutations causing Wilson disease exactly, especially in patients with a family history of Wilson’s dísease or the patient has symptoms atypical . So that, my research is conducted with these objectives: (1). Detecting ATP7B gene mutations in patients with Wilson’s disease.. (2). Establishing distribution map of ATP7B gene mutations in studied patients with Wilson’s disease. Research Methods: Prospective study and cross-sectional descriptive study. Study design includes the steps of: (1). Identify patients with Wilson’s disease; (2). Collect blood sample (venous blood 3ml + EDTA ); (3). Extract DNA from blood samples of studied patients; (4). Amplify 21 exons of ATP7B gene by PCR; (5). Purify PCR product; (6). Sequence; (7). Compare on GenBank; (8). Identify ATP7B gene mutations; (9). Design ATP7B gene mutations maps .. The techniques are used in this study : DNA extraction techniques from blood samples, measurement of DNA concentration and purity (spectroscopic techniques and agarose gel electrophoresis), PCR amplification of 21 exons of ATP7B gene and Gene sequencing techniques to detect mutations .. Findings: (1). Research has identified 48/61 patients with ATP7B gene mutations, accounting for 78.69% ratio. There are 28 different mutations in 117 genes mutations found in the ATP7B gene, including 12 types of new discovered mutations in patients with no material research published: Mutations at the 5'UTR, mutations creating ending stocks, nucleotide substitution mutation, more nucleotide mutations, mutations in non-coding region and in the coding region of gene. (2). Completed design map of ATP7B gene mutations in Vietnamese patients with Wilson’s disease, with a total of 117 mutations of 28 types located on 13 exons and funtional region of gene, in which 12 new mutations found in patients that have not seen published in any official document.. This is the first comprehensive study about detections of ATP7B gene mutations by using modern molecular biology techniques. The results of the thesis are very important to contribute to the collection of Wilson disease-related mutations, explain the pathogenesis, establish reliable diagnostic method that enables the screening and genetic counseling which aim to prevent and reduce disease incidence SUPERVISOR MD., PhD., Ass Prof Nguyen Ngoc Hung PhD STUDENT Phan Ton Hoang .